不发sci不毕业
最后活动于 1970-01-01
在小鼠试验中,AAV5及AAV6是感染肺部的理想选择。
首先我们可以使用局部注射(针对目标器官原位注射),选择正确的AAV血清型,其次还可以使用特异性启动子来表达外源基因,还可以使用Dio系统在特定脏器中表达。
AAV腺相关病毒感染心脏时血清型如何选择?
腺相关病毒(AAV)感染肾脏时哪些血清型效果好?
由于AAV的基因组是单链DNA,进入细胞后需经过由单链变成双链的过程才能开始转录翻译。体外培养的细胞体系中如果没有辅助病毒或者辅助因子的情况下,这种DNA单链转变成DNA双链的过程非常缓慢,所以目的基因表达滞后。而AAV注射进动物体内之后,靶器官组织里的各种辅助因子相对丰富,有助于AAV在体内快速表达,表达水平和持续时间更加稳定。
慢病毒感染后为什么细胞中出现大量黑点,并影响细胞生长?
AAV/Cas9载体的实现就是首先把 Cas9的序列重组进 AAV 的基因组内,而 AAV 将 Cas9的序列送到动物体内特定的组织里,在病毒基因复制过程中,从何实现 Cas9的基因敲除。
目的细胞感染慢病毒后,为什么荧光强度很弱?
较为常用的方法有鼻内滴注法、气管插管术气管内注射,如果对肺部感染AAV的特异性要求较低,也可采用静脉注射、腹腔注射等方法。
什么是过表达细胞系?
目前最常用的腺病毒包装体系有AdEasy和AdMAX两种,这两个系统均具有腺病毒早期转录复制基因E1和E3的缺陷(△E1,△E3),其中E3基因对病毒产生并非必需因此,腺病毒包装必需依赖表达E1的细胞系,例如HEK-293,HEK-293A等。腺病毒包装最好使用293A,不要用293T。
siRNA和shRNA的有什么区别?
慢病毒感染效率低有多种原因,比如某些原代细胞自身就比较难被感染(可以适当提高感染病毒量,或者采用多次感染法),细胞状态差也会影响病毒感染细胞效率,其次包装出来的病毒液尽量避免反复冻融(每次冻融会使病毒滴度降低10%~50%)。
什么情况下适合选用慢病毒载体呢?
收到病毒液后,如果能在一周内使用完毕可以将病毒液储存于4℃,如果试验周期长最好分装后储存于-80℃。另外,反复冻融会降低病毒滴度,而且病毒液储存时间超过6个月建议重新测定病毒滴度呦~
我养的小鼠原代T细胞,应该用什么病毒感染进行实验呢?
蛋白条带长度不一,为什么?