请教各位做过的lncRNA克隆到慢病毒载体中,需要在序列末端带上poly A序列吗?
请教各位做过的lncRNA克隆到慢病毒载体中,需要在序列末端带上poly A序列吗?
By Heng
at 2015-05-22
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请教各位做过的lncRNA克隆到慢病毒载体中,需要在序列末端带上poly A序列吗?
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1 个回复 | 最后更新于 2015-05-22
lncRNA 用慢病毒风险很大,慢病毒是RNA病毒,lncRNA的转录终止需要polyA,而polyA会导致慢病毒包装过程中,慢病毒基因组的表达提前终止,导致慢病毒包毒不成功。lncRNA很多的polyA需要外加,因为自身不一定带。还有一点,有些LncRNA会发生自切割,因此在包装的时候,转录出来的慢病毒基因组也可能因为lncRNA的自切割而发生断裂,导致包毒失败。还有就是有些公司不会在载体上加入lncRNA转录终止所需的polyA,这样的lncRNA能用慢病毒进行包装,且包出来的lncRNA可以用QPCR检测得到,但是这样表达出来的lncRNA比原始的lnc长度可能更长,功能也可能发生变化。建议LncRNA以DNA病毒为载体,腺病毒为LncRNA的良好兼容载体,针对LncRNA的表达,在腺病毒载体上局部引入polyA位点,适合LncRNA的表达。