慢病毒感染肿瘤细胞 载体没有抗性 怎么筛选
慢病毒感染肿瘤细胞 载体没有抗性 怎么筛选
By Heng
at 2015-09-16
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慢病毒感染肿瘤细胞 载体没有抗性 怎么筛选
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1 个回复 | 最后更新于 2015-09-16
这两种方式都是可以的,流式分选的优势在于可以很快获得全GFP阳性的细胞群,而且为混合型的,但缺点是需要准备的细胞量比较多,通常10^8数量级了,另外获得的细胞群中由于部分细胞中属于非整合表达的,所以后续培养中会出现GFP丢失的现象。挑选GFP阳性细胞进行稳定株的筛选理论上也是可以的,就是将细胞进行无限稀释后接种至96孔板内培养,待克隆形成后选取GFP全阳性且为单克隆的孔,继续扩大培养,后进行鉴定即可。为保证成功率及避免非整合表达的状况,一般可多挑选GFP全阳性单克隆。从损伤的角度来说挑单克隆基本都不会产生细胞损伤,但因为缺少抗性基因都可能存在“稳定株”建成后GFP丢失的状况。