293t细胞包装病毒,包装时的10%DMEM中加入1%非必须氨基酸和丙酮酸钠,包装系统是PLVX-PURO(10 μg)、PSPAX2(7.5 μg)、PMD2G(2.5 μg)。在10cm皿中,收取48h(10ml)和72h(10ml)含病毒培养液,混合后用0.22微米的滤膜过滤,分装后保存于-80℃冰箱,使用前化冻,感染时六孔板中细胞融合率大约在50%,病毒体积设置了1ml、3ml、5ml梯度,polybrene浓度为5μg/mL,感染12h后换完全培养液,但是蛋白表达程度并没有随体积而增强,因为加入5ml病毒原液的皿中有很多细胞感染后死亡,所以我感觉病毒量应该够了,想不出原因,有人知道吗?

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2019/12/20

病毒原液加进去很多细胞死亡的话,那也有可能这个MOI值太高,你可以尝试下降低下MOI,如果是细胞状态太差可能还没有来得及进行蛋白的表达就挂了。另外建议同步进行QPCR的检测,这样优先确保的确基因水平上是有进行过表达。感染细胞的时候看到表达,只能说明是感染效率,并不代表基因或者是蛋白水平上的上调哦~

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